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| 1 | +# 微生物的培养技术及应用 |
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| 3 | +> 来源:人教版高中生物选择性必修三(2019新课标) |
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| 7 | +## 培养基的配制 |
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| 9 | +**培养基(culture medium)**:按照微生物对营养物质的不同需求,配制供其生长繁殖的营养基质。用于培养、分离、鉴定、保存微生物或积累代谢物。 |
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| 11 | +### 培养基类型 |
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| 13 | +- **液体培养基**(无凝固剂) |
| 14 | +- **固体培养基**(加入琼脂,实验室最常用) |
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| 16 | +### 培养基共同成分 |
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| 18 | +| 成分 | 作用 | |
| 19 | +|------|------| |
| 20 | +| 水 | 溶剂和反应介质 | |
| 21 | +| **碳源** | 提供碳元素 | |
| 22 | +| **氮源** | 提供氮元素 | |
| 23 | +| 无机盐 | 维持渗透压和代谢 | |
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| 25 | +### 实例——牛肉膏蛋白胨培养基(/1000mL) |
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| 27 | +| 组分 | 含量 | 提供营养 | |
| 28 | +|------|------|----------| |
| 29 | +| 牛肉膏 | 5 g | 碳源、氮源、磷酸盐、维生素 | |
| 30 | +| 蛋白胨 | 10 g | 碳源、氮源、维生素 | |
| 31 | +| NaCl | 5 g | 无机盐 | |
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| 33 | +### 特殊营养需求 |
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| 35 | +| 微生物 | 特殊要求 | |
| 36 | +|--------|----------| |
| 37 | +| 乳酸杆菌 | 需添加**维生素** | |
| 38 | +| 霉菌 | 培养基调至**酸性** | |
| 39 | +| 细菌 | 培养基调至**中性或弱碱性** | |
| 40 | +| 厌氧微生物 | 提供**无氧条件** | |
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| 44 | +## 无菌技术 |
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| 46 | +### 概念区分 |
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| 48 | +| 术语 | 定义 | 特点 | |
| 49 | +|------|------|------| |
| 50 | +| **消毒**(disinfection) | 使用温和方法杀死物体表面或内部**一部分**微生物 | 不灭芽孢 | |
| 51 | +| **灭菌**(sterilization) | 使用强烈理化方法杀死**所有**微生物 | 包括芽孢和孢子 | |
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| 53 | +### 消毒与灭菌方法 |
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| 55 | +| 方法 | 条件 | 适用对象 | |
| 56 | +|------|------|----------| |
| 57 | +| 煮沸消毒 | 100℃,5~6 min | 日常物品 | |
| 58 | +| 巴氏消毒 | 63~65℃/30min 或 72~76℃/15s 等 | 牛奶等不耐高温液体 | |
| 59 | +| 酒精消毒 | 70% 酒精擦拭 | 双手、器具 | |
| 60 | +| 紫外线消毒 | 照射 30 min | 接种室、超净工作台 | |
| 61 | +| 高压蒸汽灭菌 | 100 kPa,121℃,15~30 min | 培养基、器械(**最常用**)| |
| 62 | +| 干热灭菌 | 160~170℃,1~2 h | 玻璃器皿、金属用具(需保持干燥)| |
| 63 | +| 灼烧灭菌 | 酒精灯火焰 | 接种工具、管口 | |
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| 65 | +!!! tip "操作要点" |
| 66 | + 操作应在**超净工作台**、靠近**酒精灯火焰**进行。 |
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| 70 | +## 微生物的纯培养 |
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| 72 | +**纯培养物**:由单一个体繁殖所获得的微生物群体。 |
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| 74 | +**单菌落**:分散的微生物在固体培养基表面或内部繁殖,形成的肉眼可见、有一定形态结构的子细胞群体。**一个单菌落一般来源于一个活菌**。 |
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| 76 | +### 平板划线法 |
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| 78 | +通过接种环在固体培养基表面连续划线,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面,经培养获得**单菌落**(纯培养物)。 |
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| 80 | +### 稀释涂布平板法 |
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| 82 | +将菌液进行**梯度稀释**($10 \rightarrow 10^2 \rightarrow 10^3 \rightarrow \dots$),取 0.1 mL 涂布在固体培养基表面,长出的单菌落来自单个活菌。 |
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| 84 | +### 倒平板操作 |
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| 86 | +1. 拔出棉塞,瓶口通过火焰 |
| 87 | +2. 培养皿打开一条缝隙,倒入培养基(10~20 mL) |
| 88 | +3. 立即盖上皿盖 |
| 89 | +4. 冷却凝固后**倒置**放置(防冷凝水滴落污染) |
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| 93 | +## 微生物的选择培养和计数 |
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| 95 | +### 选择培养基 |
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| 97 | +**原理**:人为提供有利于**目的菌**生长的条件(营养、温度、pH),同时抑制其他微生物。 |
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| 99 | +| 设计 | 目的菌 | 原理 | |
| 100 | +|------|--------|------| |
| 101 | +| 以**尿素**为唯一氮源 | 分解尿素细菌 | 只有能合成**脲酶**的才能分解尿素产生NH₃ | |
| 102 | +| 以**纤维素**为唯一碳源 | 纤维素分解菌 | 只有能产生**纤维素酶**的才能利用纤维素 | |
| 103 | +| 70~80℃培养 | 水生栖热菌 | 其他微生物在此高温不能生存 | |
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| 105 | +!!! info "Taq DNA聚合酶的发现" |
| 106 | + 1973年从美国黄石国家公园**热泉**中筛选出水生栖热菌(Thermus aquaticus),提取出耐高温 **Taq DNA聚合酶**,广泛用于 PCR。 |
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| 108 | +### 土壤中分解尿素细菌的分离与计数 |
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| 110 | +**步骤**:取土(3~8 cm深处)→ 梯度稀释($1\times10^3 \sim 1\times10^7$)→ 涂布于选择培养基 → 30~37℃培养 1~2 d → 计数(选择菌落数 **30~300** 的平板) |
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| 112 | +### 计数方法对比 |
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| 114 | +| 方法 | 原理 | 优点 | 缺点 | |
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| 116 | +| 稀释涂布平板法 | 一个单菌落≈一个活菌 | 操作简便 | 多个细胞连在一起时低估 | |
| 117 | +| 显微镜直接计数 | 用计数板在显微镜下观察 | 快速得到总数 | 死活菌均计入 | |
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| 121 | +## 核心概念速记 |
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| 123 | +``` |
| 124 | +培养基 = 水 + 碳源 + 氮源 + 无机盐 + 特殊营养 |
| 125 | +消毒 = 杀死一部分微生物(不灭芽孢) |
| 126 | +灭菌 = 杀死所有微生物(包括芽孢、孢子) |
| 127 | +纯培养 = 获得单一菌种的过程 |
| 128 | +菌落 = 单菌落 ≈ 单个活菌 |
| 129 | +选择培养基 = 只让目的菌生长(提供特定营养/条件) |
| 130 | +计数:30~300/平板 |
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